Polysacharid z Chlorelly (PFC) ako prírodný polysacharid v posledných rokoch pritiahol veľkú pozornosť vedcov vďaka svojim výhodám nízkej toxicity, nízkeho počtu vedľajších účinkov a širokospektrálnemu účinku. Jeho funkcie pri znižovaní krvných lipidov, protinádorových, protizápalových, proti Parkinsonovej chorobe, proti starnutiu atď. boli predbežne overené v experimentoch in vitro a in vivo. Vo výskume PFC ako modulátora ľudskej imunity však stále pretrváva medzera.

Dendritické bunky (DC) sú najsilnejšie špecializované bunky prezentujúce antigén v ľudskom tele. Počet DC v ľudskom tele je extrémne malý a bežne sa používa model indukcie in vitro sprostredkovaný cytokínmi, konkrétne DC odvodené z mononukleárnych buniek periférnej krvi (moDC). Model indukovaných DC in vitro bol prvýkrát publikovaný v roku 1992 a predstavuje tradičný kultivačný systém pre DC. Vo všeobecnosti vyžaduje kultiváciu počas 6 – 7 dní. Myšie bunky kostnej drene sa môžu kultivovať s faktorom stimulujúcim kolónie granulocytov a makrofágov (GM-CSF) a interleukínom (IL)-4, aby sa získali nezrelé DC (skupina PBS). Cytokíny sa pridávajú ako zrelé stimuly a kultivujú sa 1 – 2 dni, aby sa získali zrelé DC. Ďalšia štúdia uvádza, že purifikované ľudské CD14+ bunky boli kultivované s interferónom – β (IFN – β) alebo IL-4 počas 5 dní a potom kultivované s tumor nekrotizujúcim faktorom-a (TNF-a) počas 2 dní, aby sa získali DC s vysokou expresiou CD11c a CD83, ktoré majú silnejšiu schopnosť podporovať proliferáciu alogénnych CD4+T buniek a CD8+T buniek. Mnohé polysacharidy z prírodných zdrojov majú vynikajúcu imunomodulačnú aktivitu, ako napríklad polysacharidy zo shiitake, húb s rozštiepenými žiabrami, húb Yunzhi a Poria cocos, ktoré sa používajú v klinickej praxi. Môžu účinne zlepšiť imunitné funkcie tela, posilniť imunitu a slúžiť ako adjuvantná terapia pri protinádorovej liečbe. Existuje však len málo výskumných správ o PFC ako ľudskom imunomodulátore. Preto tento článok vykonáva predbežný výskum úlohy a súvisiacich mechanizmov PFC pri podpore dozrievania moDC, aby sa vyhodnotil potenciál PFC ako prirodzeného imunomodulátora.

Vzhľadom na extrémne nízky podiel dendritických buniek (DC) v ľudských tkanivách a vysokú medzidruhovú konzerváciu medzi myšími DC a ľudskými DC, s cieľom vyriešiť výskumné ťažkosti spôsobené nízkou produkciou DC, boli študované in vitro indukčné modely DC odvodených z mononukleárnych buniek ľudskej periférnej krvi, ktoré umožňujú získať DC s dobrou imunogenicitou v krátkom časovom období. Preto sa v tejto štúdii použila tradičná metóda indukcie ľudských DC in vitro: kokultivácia rhGM CSF a rhIL-4 in vitro, výmena média každý druhý deň a získanie nezrelých DC na 5. deň. Na 6. deň sa pridali rovnaké objemy PBS, PFC a LPS podľa zoskupenia a kultivovali sa 24 hodín ako kultivačný protokol na indukciu DC odvodených z mononukleárnych buniek ľudskej periférnej krvi.

Polysacharidy odvodené z prírodných produktov majú výhody nízkej toxicity a nízkych nákladov ako imunostimulanty. Po predbežných experimentoch naša výskumná skupina zistila, že PFC významne zvyšuje zrelý marker CD83 na povrchu DC buniek odvodených z mononukleárnych buniek ľudskej periférnej krvi indukovaných in vitro. Výsledky prietokovej cytometrie ukázali, že intervencia PFC v koncentrácii 10 μg/ml počas 24 hodín viedla k maximálnej expresii zrelého markera CD83 na povrchu DC, čo naznačuje, že DC vstúpili do zrelého stavu. Preto naša výskumná skupina stanovila plán indukcie a intervencie in vitro. CD83 je dôležitý zrelý biomarker na povrchu DC, zatiaľ čo CD86 slúži ako dôležitá kostimulačná molekula na povrchu DC a pôsobí ako druhý signál pre aktiváciu T buniek. Zvýšená expresia dvoch biomarkerov CD83 a CD86 naznačuje, že PFC podporuje dozrievanie DC odvodených z mononukleárnych buniek ľudskej periférnej krvi, čo naznačuje, že PFC môže súčasne zvyšovať hladinu sekrécie cytokínov na povrchu DC. Táto štúdia preto hodnotila hladiny cytokínov IL-6, TNF-a a IL-10 vylučovaných DC pomocou ELISA. IL-10 úzko súvisí s imunitnou toleranciou DC a DC s imunitnou toleranciou sa bežne používajú pri liečbe nádorov, čo poskytuje potenciálne terapeutické nápady pre imunitnú toleranciu pri transplantácii orgánov; Rodina 1L-6 hrá dôležitú úlohu vo vrodenej a adaptívnej imunite, hematopoéze a protizápalových účinkoch; Existujú štúdie naznačujúce, že IL-6 a TGF β sa spoločne podieľajú na diferenciácii buniek Th17; Keď je telo napadnuté vírusom, TNF-a produkovaný DC v reakcii na aktiváciu vírusu pôsobí ako autokrinný faktor dozrievania na podporu dozrievania DC. Blokovanie TNF-a uvedie DC do nezrelého štádia, čo im zabráni v plnom výkone ich funkcie prezentácie antigénu. Údaje z ELISA v tejto štúdii ukázali, že hladina sekrécie IL-10 v skupine PFC bola významne zvýšená v porovnaní s ostatnými dvoma skupinami, čo naznačuje, že PFC zvyšuje imunitnú toleranciu DC; Zvyšujúce sa hladiny sekrécie IL-6 a TNF-a naznačujú, že PFC môže mať účinok zosilnenia DC na podporu diferenciácie T buniek.