Polisaharid iz Chlorelle (PFC), kao prirodni polisaharid, posljednjih je godina privukao veliku pozornost znanstvenika zbog svojih prednosti niske toksičnosti, malog broja nuspojava i širokog spektra djelovanja. Njegove funkcije u snižavanju lipida u krvi, antitumorskom, protuupalnom djelovanju, djelovanju protiv Parkinsonove bolesti, protiv starenja itd. preliminarno su potvrđene in vitro i in vivo eksperimentima. Međutim, još uvijek postoji praznina u istraživanju PFC-a kao modulatora ljudskog imuniteta.

Dendritične stanice (DC) su najmoćnije specijalizirane stanice koje prezentiraju antigen u ljudskom tijelu. Broj DC u ljudskom tijelu je izuzetno malen, a često se koristi model indukcije in vitro posredovan citokinima, naime DC mononuklearne stanice izvedene iz periferne krvi ljudi (moDC). Model induciranih DC prvi put je opisan 1992. godine, što je tradicionalni sustav uzgoja DC-a. Općenito, zahtijeva uzgoj tijekom 6-7 dana. Stanice koštane srži miša mogu se uzgajati s faktorom stimulacije kolonija granulocita i makrofaga (GM-CSF) i interleukinom (IL)-4 kako bi se dobile nezrele DC (PBS skupina). Citokini se dodaju kao zreli podražaji i uzgajaju 1-2 dana kako bi se dobile zrele DC-e. Druga studija izvijestila je da su pročišćene ljudske CD14+ stanice uzgajane s interferonom-β (IFN-β) ili IL-4 tijekom 5 dana, a zatim s faktorom tumorske nekroze-a (TNF-a) tijekom 2 dana kako bi se dobile DC s visokom ekspresijom CD11c i CD83, koje imaju jaču sposobnost poticanja proliferacije alogenih CD4+T stanica i CD8+T stanica. Brojni polisaharidi iz prirodnih izvora imaju izvrsnu imunomodulatornu aktivnost, poput polisaharida iz shiitake gljiva, gljiva s rascijepljenim škrgama, gljiva Yunzhi i Poria cocos, koji su primijenjeni u kliničkoj praksi. Oni mogu učinkovito poboljšati imunološki sustav tijela, pojačati imunitet i poslužiti kao adjuvantne terapije za antitumorsko liječenje. Međutim, postoji malo istraživačkih izvješća o PFC-u kao modulatoru ljudskog imuniteta. Stoga ovaj članak provodi preliminarno istraživanje o ulozi i srodnim mehanizmima PFC-a u poticanju sazrijevanja moDC-a, kako bi se procijenio potencijal PFC-a kao prirodnog modulatora imuniteta.

Zbog izuzetno niskog udjela DC-a u ljudskim tkivima i visoke međuvrstne očuvanosti između mišjih DC-a i ljudskih DC-a, kako bi se riješile istraživačke poteškoće uzrokovane niskom proizvodnjom DC-a, proučavani su in vitro indukcijski modeli DC-a dobivenih iz mononuklearnih stanica periferne krvi ljudi, koji mogu dobiti DC-e s dobrom imunogenošću u kratkom vremenskom razdoblju. Stoga je u ovoj studiji korištena tradicionalna metoda indukcije ljudskih DC-a in vitro: kokultivacija rhGM CSF i rhIL-4 in vitro, promjena medija svaki drugi dan i dobivanje nezrelih DC-a 5. dana; 6. dana dodani su jednaki volumeni PBS-a, PFC-a i LPS-a prema grupiranju i kultivirani 24 sata kao protokol kulture za indukciju DC-a dobivenih iz mononuklearnih stanica periferne krvi ljudi.

Polisaharidi dobiveni iz prirodnih proizvoda imaju prednosti niske toksičnosti i niske cijene kao imunostimulansi. Nakon preliminarnih eksperimenata, naša istraživačka skupina otkrila je da PFC značajno pojačava zreli marker CD83 na površini DC stanica izvedenih iz mononuklearnih stanica periferne krvi ljudi induciranih in vitro. Rezultati protočne citometrije pokazali su da intervencija PFC-a u koncentraciji od 10 μg/mL tijekom 24 sata rezultira vršnom ekspresijom zrelog markera CD83 na površini DC-a, što ukazuje na to da su DC-i ušli u zrelo stanje. Stoga je naša istraživačka skupina odredila plan indukcije i intervencije in vitro. CD83 je važan zreli biomarker na površini DC-a, dok CD86 služi kao važna kostimulatorna molekula na površini DC-a, djelujući kao drugi signal za aktiviranje T stanica. Povećana ekspresija dva biomarkera CD83 i CD86 ukazuje na to da PFC potiče sazrijevanje DC-a izvedenih iz mononuklearnih stanica periferne krvi ljudi, što sugerira da PFC može istovremeno povećati razinu lučenja citokina na površini DC-a. Stoga je ova studija procijenila razine citokina IL-6, TNF-a i IL-10 koje izlučuju DC pomoću ELISA testa. IL-10 je usko povezan s imunološkom tolerancijom DC-a, a DC-i s imunološkom tolerancijom se često koriste u liječenju tumora, pružajući potencijalne terapijske ideje za imunološku toleranciju kod transplantacije organa; Obitelj 1L-6 igra važnu ulogu u urođenom i adaptivnom imunitetu, hematopoezi i protuupalnim učincima; Postoje studije koje ukazuju da IL-6 i TGF β zajedno sudjeluju u diferencijaciji Th17 stanica; Kada tijelo napadne virus, TNF-a koji proizvode DC-i kao odgovor na aktivaciju virusa djeluje kao autokrini faktor sazrijevanja kako bi potaknuo sazrijevanje DC-a. Blokiranje TNF-a će dovesti DC-e u nezrelu fazu, sprječavajući ih da u potpunosti izvrše svoju funkciju prezentacije antigena. ELISA podaci u ovoj studiji pokazali su da je razina lučenja IL-10 u PFC skupini značajno povećana u usporedbi s druge dvije skupine, što ukazuje da PFC pojačava imunološku toleranciju DC-a; Povećane razine lučenja IL-6 i TNF-a sugeriraju da bi PFC mogao imati učinak pojačavanja DC-a kako bi se potaknula diferencijacija T stanica.