Polisaharid iz Chlorella-e (PFC), kao prirodni polisaharid, privukao je mnogo pažnje naučnika posljednjih godina zbog svojih prednosti niske toksičnosti, malog broja nuspojava i širokog spektra djelovanja. Njegove funkcije u snižavanju lipida u krvi, antitumorskom, protuupalnom djelovanju, djelovanju protiv Parkinsonove bolesti, protiv starenja itd. su preliminarno potvrđene in vitro i in vivo eksperimentima. Međutim, još uvijek postoji praznina u istraživanju PFC-a kao modulatora ljudskog imuniteta.

Dendritične ćelije (DC) su najmoćnije specijalizirane ćelije koje prezentiraju antigen u ljudskom tijelu. Broj DC u ljudskom tijelu je izuzetno mali, a često se koristi model indukcije in vitro posredovan citokinima, naime DC mononuklearne ćelije izvedene iz periferne krvi ljudi (moDC). Model induciranih DC prvi put je opisan 1992. godine, što je tradicionalni sistem kulture za DC. Općenito, potrebna je kultivacija tokom 6-7 dana. Ćelije koštane srži miša mogu se kultivirati sa faktorom stimulacije kolonija granulocita i makrofaga (GM-CSF) i interleukinom (IL)-4 kako bi se dobile nezrele DC (PBS grupa). Citokini se dodaju kao zreli stimulansi i kultiviraju se 1-2 dana kako bi se dobile zrele DC. Druga studija je izvijestila da su pročišćene ljudske CD14+ ćelije kultivirane s interferonom-β (IFN-β) ili IL-4 tokom 5 dana, a zatim kultivirane s faktorom tumorske nekroze-a (TNF-a) tokom 2 dana kako bi se dobile DC s visokom ekspresijom CD11c i CD83, koje imaju jaču sposobnost promoviranja proliferacije alogenih CD4+T ćelija i CD8+T ćelija. Brojni polisaharidi iz prirodnih izvora imaju odličnu imunomodulatornu aktivnost, poput polisaharida iz šitake gljiva, gljiva sa split gill, gljiva Yunzhi i Poria cocos, koji su primijenjeni u kliničkoj praksi. Oni mogu efikasno poboljšati imunološku funkciju tijela, pojačati imunitet i poslužiti kao adjuvantne terapije za antitumorski tretman. Međutim, postoji malo istraživačkih izvještaja o PFC kao modulatoru ljudskog imuniteta. Stoga, ovaj članak provodi preliminarno istraživanje o ulozi i srodnim mehanizmima PFC u promoviranju sazrijevanja moDC, kako bi se procijenio potencijal PFC kao prirodnog modulatora imuniteta.

Zbog izuzetno niskog udjela DC u ljudskim tkivima i visoke međuvrstne očuvanosti između mišjih DC i ljudskih DC, kako bi se riješile istraživačke poteškoće uzrokovane niskom proizvodnjom DC, proučavani su in vitro indukcijski modeli DC izvedenih iz mononuklearnih ćelija periferne krvi ljudi, koji mogu dobiti DC sa dobrom imunogenošću u kratkom vremenskom periodu. Stoga je u ovoj studiji korištena tradicionalna metoda indukcije ljudskih DC in vitro: kokultivacija rhGM CSF i rhIL-4 in vitro, promjena medija svaki drugi dan i dobijanje nezrelih DC 5. dana; 6. dana, dodani su jednaki volumeni PBS, PFC i LPS prema grupiranju i kultivirani 24 sata kao protokol kulture za indukciju DC izvedenih iz mononuklearnih ćelija periferne krvi ljudi.

Polisaharidi dobiveni iz prirodnih proizvoda imaju prednosti niske toksičnosti i niske cijene kao imunostimulansi. Nakon preliminarnih eksperimenata, naša istraživačka grupa je otkrila da PFC značajno pojačava zreli marker CD83 na površini DC ćelija izvedenih iz mononuklearnih ćelija ljudske periferne krvi, induciranih in vitro. Rezultati protočne citometrije pokazali su da intervencija PFC-a u koncentraciji od 10 μg/mL tokom 24 sata rezultira vršnom ekspresijom zrelog markera CD83 na površini DC-a, što ukazuje na to da su DC-i ušli u zrelo stanje. Stoga je naša istraživačka grupa odredila plan indukcije i intervencije in vitro. CD83 je važan zreli biomarker na površini DC-a, dok CD86 služi kao važan kostimulatorni molekul na površini DC-a, djelujući kao drugi signal za aktiviranje T ćelija. Pojačana ekspresija dva biomarkera CD83 i CD86 ukazuje na to da PFC promovira sazrijevanje DC-a izvedenih iz mononuklearnih ćelija ljudske periferne krvi, što sugerira da PFC može istovremeno povećati nivo sekrecije citokina na površini DC-a. Stoga je ova studija procijenila nivoe citokina IL-6, TNF-a i IL-10 koje luče DC koristeći ELISA test. IL-10 je usko povezan s imunološkom tolerancijom DC, a DC s imunološkom tolerancijom se često koriste u liječenju tumora, pružajući potencijalne terapijske ideje za imunološku toleranciju kod transplantacije organa; Porodica 1L-6 igra važnu ulogu u urođenom i adaptivnom imunitetu, hematopoezi i protuupalnim efektima; Postoje studije koje ukazuju da IL-6 i TGF β zajedno učestvuju u diferencijaciji Th17 ćelija; Kada tijelo napadne virus, TNF-a koji proizvode DC kao odgovor na aktivaciju virusa djeluje kao autokrini faktor sazrijevanja kako bi se potaknulo sazrijevanje DC. Blokiranje TNF-a će dovesti DC u nezrelu fazu, sprječavajući ih da u potpunosti izvrše svoju funkciju prezentacije antigena. ELISA podaci u ovoj studiji pokazali su da je nivo sekrecije IL-10 u PFC grupi značajno povećan u poređenju s druge dvije grupe, što ukazuje da PFC pojačava imunološku toleranciju DC; Povećani nivoi sekrecije IL-6 i TNF-α ukazuju na to da PFC može imati efekat pojačavanja DC-a kako bi se promovisala diferencijacija T ćelija.