Chlorelės polisacharidas (PFC), kaip natūralus polisacharidas, pastaraisiais metais sulaukė didelio mokslininkų dėmesio dėl savo mažo toksiškumo, nedidelio šalutinio poveikio ir plataus spektro poveikio. Jo funkcijos mažinant kraujo lipidų kiekį, priešnavikinis, priešuždegiminis, prieš Parkinsono ligą, senėjimą stabdantis ir kt. buvo preliminariai patvirtintos in vitro ir in vivo eksperimentais. Tačiau PFC, kaip žmogaus imunomoduliatoriaus, tyrimuose vis dar yra spragų.

Dendritinės ląstelės (DC) yra galingiausios specializuotos antigeną pateikiančios ląstelės žmogaus organizme. DC skaičius žmogaus organizme yra itin mažas, todėl dažniausiai naudojamas citokinų tarpininkaujamas in vitro indukcijos modelis, būtent iš žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių gautos DC (mDC). In vitro indukuotų DC modelis pirmą kartą buvo aprašytas 1992 m., ir tai yra tradicinė DC kultivavimo sistema. Paprastai jį reikia kultivuoti 6–7 dienas. Pelių kaulų čiulpų ląsteles galima kultivuoti su granulocitų makrofagų kolonijas stimuliuojančiu faktoriumi (GM-CSF) ir interleukinu (IL) -4, kad būtų gautos nesubrendusios DC (PBS grupė). Citokinai pridedami kaip subrendę stimulai ir kultivuojami 1–2 dienas, kad būtų gautos subrendusios DC. Kitame tyrime pranešta, kad išgrynintos žmogaus CD14+ ląstelės 5 dienas buvo kultivuojamos su interferonu β (IFN-β) arba IL-4, o po to 2 dienas kultivuojamos su naviko nekrozės faktoriumi α (TNF-α), siekiant gauti DC su didele CD11c ir CD83 raiška, kurios pasižymi stipresniu gebėjimu skatinti alogeninių CD4+T ir CD8+T ląstelių proliferaciją. Daugybė polisacharidų iš natūralių šaltinių pasižymi puikiu imunomoduliaciniu aktyvumu, pavyzdžiui, polisacharidai iš šitakės grybų, skaldytų žiaunų grybų, Yunzhi grybų ir Poria cocos, kurie buvo taikomi klinikinėje praktikoje. Jie gali veiksmingai pagerinti organizmo imuninę funkciją, sustiprinti imunitetą ir būti adjuvantine terapija priešnavikiniam gydymui. Tačiau yra nedaug tyrimų apie PFŽ kaip žmogaus imunomoduliatorių. Todėl šiame straipsnyje atliekami preliminarūs PFŽ vaidmens ir susijusių mechanizmų tyrimai skatinant moDC brendimą, siekiant įvertinti PFŽ kaip natūralaus imunomoduliatoriaus potencialą.

Dėl itin mažos DC dalies žmogaus audiniuose ir didelio tarprūšinio konservatyvumo tarp pelių ir žmogaus DC, siekiant išspręsti tyrimų sunkumus, kylančius dėl mažos DC gamybos, buvo tiriami iš žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių gautų DC in vitro indukcijos modeliai, kurie per trumpą laiką gali gauti gerą imunogeniškumą turinčias DC. Todėl šiame tyrime buvo naudojamas tradicinis žmogaus DC indukcijos in vitro metodas: kartu kultivuojant rhGM CSF ir rhIL-4 in vitro, keičiant terpę kas antrą dieną ir gaunant nesubrendusias DC 5-tą dieną; 6-tą dieną pagal grupę buvo pridėti vienodi PBS, PFC ir LPS tūriai ir kultivuojami 24 valandas, kaip kultivavimo protokolas, skirtas iš žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių gautų DC indukcijai.

Iš natūralių produktų gauti polisacharidai pasižymi mažu toksiškumu ir maža kaina kaip imunostimuliatoriai. Atlikusi preliminarius eksperimentus, mūsų tyrimų grupė nustatė, kad PFK reikšmingai sustiprina subrendusį žymenį CD83 ant žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių kilmės DC ląstelių paviršiaus, sukeltų in vitro. Srauto citometrijos rezultatai parodė, kad PFK intervencija, kurios koncentracija buvo 10 μg/ml 24 valandas, lėmė subrendusio žymens CD83 ekspresijos piką DC paviršiuje, o tai rodo, kad DC pasiekė brandžią būseną. Todėl mūsų tyrimų grupė nustatė in vitro indukcijos ir intervencijos planą. CD83 yra svarbus subrendęs biožymuo DC paviršiuje, o CD86 yra svarbi kostimuliacinė molekulė DC paviršiuje, veikianti kaip antrasis signalas T ląstelėms aktyvuoti. Padidėjusi dviejų biožymenų CD83 ir CD86 ekspresija rodo, kad PFK skatina žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių kilmės DC brendimą, o tai rodo, kad PFK tuo pačiu metu gali padidinti citokinų sekrecijos lygį DC paviršiuje. Todėl šiame tyrime buvo įvertintas DC išskiriamų citokinų IL-6, TNF-α ir IL-10 kiekis, naudojant ELISA. IL-10 yra glaudžiai susijęs su DC imuniniu tolerancija, o DC, turinčios imuninį toleranciją, dažnai naudojamos navikų gydymui, todėl atsiranda potencialių terapinių idėjų imuniniam tolerancijai organų transplantacijos metu; 1L-6 šeima vaidina svarbų vaidmenį įgimtame ir adaptyviame imunitete, kraujodaroje ir priešuždegiminiame poveikyje; Yra tyrimų, rodančių, kad IL-6 ir TGF β kartu dalyvauja Th17 ląstelių diferenciacijoje; Kai organizmą užpuola virusas, DC gaminamas TNF-α, reaguojant į viruso aktyvaciją, veikia kaip autokrinis brendimo faktorius, skatinantis DC brendimą. TNF-α blokavimas sukels DC nesubrendusią stadiją, neleisdamas joms visapusiškai atlikti savo antigeno pateikimo funkcijos. Šio tyrimo ELISA duomenys parodė, kad IL-10 sekrecijos lygis PFG grupėje buvo žymiai padidėjęs, palyginti su kitomis dviem grupėmis, o tai rodo, kad PFG sustiprina DC imuninį toleranciją; Didėjantis IL-6 ir TNF-α sekrecijos lygis rodo, kad PFC gali sustiprinti DC ir skatinti T ląstelių diferenciaciją.